艾美捷重组蛋白酶K,无动物源AF化验方法

蛋白酶K(PROK)是一种具有广泛作用的丝氨酸内肽酶,从真菌Tritirachiumalbumliber的滤液中分离出来。

艾美捷重组蛋白酶K,无动物源/AF特征:

特异性:

除了肽键的裂解,它还能够催化肽酰胺水解。蛋白酶K被氟磷酸二异丙酯(DFP)或苯基甲烷磺酰氟(PMSF)灭活。螯合剂如柠檬酸盐和EDTA对酶活性没有影响。

应用:

蛋白酶K在分离高度天然、未受损的DNA或RNA中非常有用,因为大多数微生物或哺乳动物的DNA和RNA都被酶快速灭活,特别是在0.5-1%SDS存在下。

艾美捷重组蛋白酶K,无动物源/AF其它性质:

分子量:道尔顿。

最佳pH值:7.5-12,以变性血红蛋白为底物。

存储:PROK/PROKR:储存温度为2-8°C;PROKS/PROKRS:储存温度-20°C

沃辛顿PROK/PROKR是一种高纯度冻干粉末。代码PROKS/PROKRS是含有50%甘油的20mg/ml溶液。两者均经测试不含DNase和RNase。

艾美捷重组蛋白酶K,无动物源/AF化验方法:

蛋白酶K水解用尿素变性的血红蛋白,并释放Folin阳性氨基酸和肽,这些氨基酸和肽被确定为酪氨酸当量。1个单位在37°C、pH7.5下释放1μmolFolin阳性氨基酸,使用变性血红蛋白作为底物。

试剂

0.05NHCl-稀释0.82ml浓度。用试剂级水将HCl稀释至ml。

0.5MNaOH-将4.0gmNaOH溶解在ml试剂级水中。

缓冲底物-将2.0克血红蛋白溶解在35毫升试剂级水中,加入36.0克尿素和16毫升0.5MNaOH。室温下搅拌30-60分钟。加入0.克硼-酸并搅拌。用5NHCl将pH调至7.5,并将qs.调至ml。

酪氨酸标准(2.5nmol/L)-将45.3mg酪氨酸溶于ml0.05NHCl中。

0.3M三氯乙酸-将9.8gm三氯乙酸溶解在ml试剂级水中。

Folin试剂-将10mlFolinCiocalteus苯-酚试剂添加到20ml试剂级水中。

相关文献:

Bernabeu,C.,Conde,P.,Vasquez,D.andBallesta,J.

PeptidylTransferaseofBacterialRibosome:ResistancetoProteinaseK,EurJBiochem93,,

Betzel,C.,Pal,G.,Struck,M.,Jany,K.andSaenger,W.

Active-SiteGeometryofProteinaseK:CrystallographicStudyofItsComplexwithaDipeptideChloromethylKetoneInhibitor,F.E.B.S.Lett.,,



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